亚洲熟妇无码久久精品,JULIAANN女医生在办公室,国产JAZZ亚洲护士无码,伊人色啪啪天天综合婷婷

新聞中心您現(xiàn)在的位置:首頁(yè) > 新聞中心 > TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)具體步驟以及在檢定過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)
TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)具體步驟以及在檢定過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)
更新時(shí)間:2024-08-01   點(diǎn)擊次數(shù):209次
   TUNEL(Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labeling)細(xì)胞凋亡檢測(cè)技術(shù)是一種靈敏且廣泛應(yīng)用的方法,用于檢測(cè)細(xì)胞凋亡過(guò)程中DNA斷裂產(chǎn)生的3'-OH末端。本文將詳細(xì)介紹TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)的具體步驟以及在檢定過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)。

  一、TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)具體步驟

  以下步驟基于不同來(lái)源的參考信息綜合整理,具體步驟可能因試劑盒品牌或?qū)嶒?yàn)條件的不同而有所差異:

  樣本準(zhǔn)備

  組織樣本:將組織樣本進(jìn)行脫蠟和水化處理,通常包括在二甲苯中浸泡,然后用梯度乙醇(100%、95%、90%、80%、70%)逐步脫水。

  細(xì)胞樣本:對(duì)于貼壁細(xì)胞,先用PBS清洗,然后用4%多聚甲醛固定一定時(shí)間(如1小時(shí)),再進(jìn)行細(xì)胞通透處理(如使用Triton X-100)。

  細(xì)胞通透

  使用蛋白酶K(Proteinase K)處理樣本,通透細(xì)胞膜和核膜,確保TUNEL探針能夠進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)。處理時(shí)間通常為15-30分鐘,具體取決于樣本類型和厚度。

  TUNEL反應(yīng)混合液制備

  根據(jù)試劑盒說(shuō)明書(shū),制備TUNEL反應(yīng)混合液。處理組通常包括TdT酶和熒光素標(biāo)記的dUTP,而陰性對(duì)照組則不含TdT酶。

  TUNEL反應(yīng)

  將TUNEL反應(yīng)混合液滴加到樣本上,覆蓋蓋玻片或封口膜,在暗濕盒中避光孵育一定時(shí)間(如37℃下60分鐘)。

  清洗與觀察

  使用PBS充分清洗樣本,去除未結(jié)合的探針。

  在熒光顯微鏡下觀察凋亡細(xì)胞,通常使用特定的激發(fā)波長(zhǎng)(如450-500nm)和檢測(cè)波長(zhǎng)(如515-565nm)。

  (可選)酶聯(lián)顯色反應(yīng)

  對(duì)于某些試劑盒,還可以將熒光信號(hào)轉(zhuǎn)化為比色信號(hào),以便在光學(xué)顯微鏡下觀察。這通常涉及使用POD轉(zhuǎn)換液和DAB底物進(jìn)行顯色反應(yīng)。

  復(fù)染與封片

  使用蘇木素或甲基綠對(duì)樣本進(jìn)行復(fù)染,以襯托組織形態(tài)結(jié)構(gòu)。

  脫水、透明、封片后,在光學(xué)顯微鏡下觀察并拍照記錄結(jié)果。

  二、檢定過(guò)程中需要注意的事項(xiàng)

  樣本處理

  確保樣本脫蠟和水化充分,避免影響后續(xù)步驟的結(jié)合反應(yīng)。

  細(xì)胞通透時(shí)間要適中,過(guò)長(zhǎng)可能導(dǎo)致細(xì)胞破損,過(guò)短則可能影響探針進(jìn)入細(xì)胞。

  試劑配制與使用

  TUNEL反應(yīng)混合液應(yīng)在使用前新鮮配制,避免長(zhǎng)時(shí)間保存導(dǎo)致酶活性降低。

  注意TdT酶對(duì)溫度的敏感性,儲(chǔ)存和使用時(shí)應(yīng)避免反復(fù)凍融。

  實(shí)驗(yàn)條件控制

  孵育溫度和時(shí)間應(yīng)嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行,避免影響反應(yīng)效率。

  實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)避光操作,以保護(hù)熒光探針不受光淬滅。

  清洗步驟

  PBS清洗步驟應(yīng)充分,避免非特異性染色影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  清洗次數(shù)和時(shí)間可根據(jù)實(shí)際情況進(jìn)行調(diào)整。

  對(duì)照設(shè)置

  必須設(shè)置陽(yáng)性對(duì)照和陰性對(duì)照以驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性。陽(yáng)性對(duì)照通常使用DNase I處理樣本以誘導(dǎo)DNA斷裂;陰性對(duì)照則不加TdT酶。

  結(jié)果分析

  觀察結(jié)果時(shí)應(yīng)注意區(qū)分凋亡細(xì)胞與正常細(xì)胞以及非特異性染色。

  可結(jié)合復(fù)染結(jié)果和顯微鏡下的形態(tài)學(xué)特征進(jìn)行綜合分析。

  TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)涉及多個(gè)精細(xì)步驟和注意事項(xiàng)。遵循正確的操作步驟和注意檢定過(guò)程中的細(xì)節(jié)問(wèn)題對(duì)于獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果至關(guān)重要。

毓秀生物科技(上海)有限公司

毓秀生物科技(上海)有限公司

工廠地址:上海市閔行區(qū)江月路999號(hào)12號(hào)樓302室

毓秀生物科技(上海)有限公司版權(quán)所有  備案號(hào):滬ICP備19003469號(hào)-1  總訪問(wèn)量:199630  站點(diǎn)地圖  技術(shù)支持:化工儀器網(wǎng)  管理登陸

久久久久久亚洲精品不卡| JAPANESE极品丰满少妇| 浴室人妻的情欲HD三级| 97久久久久人妻精品区一| 中国妇被黑人XXX猛交| 丰满熟妇人妻中文字幕| 女教师的凌脣教室在线| 囯产精品一品二区三区| 欧美熟妇VIVOE精品| 我和岳M愉情XXXX国产| 精品2022露脸国产偷人在视频 | 国产精品无码AV天天爽水蜜桃| 亚洲欧美综合区自拍另类| 日韩AV高清无码| 天堂AV无码AV一区二区三区| 欧美乱妇无乱码大黄A片| 国产黄色视频| 我的师妹不可能是傻白甜| 少妇无码吹潮久久精品AV| 国产A级毛片| 日韩精品无码区免费专区| 无敌神马在线观看免费完整一| 亚洲AV中文无码乱人伦在线咪咕| 性饥渴艳妇K8经典A片| 暴虐SM灌浣肠调教A片男男| 中文字幕AV一区二区三区| 日产精品一区二区| 熟妇人妻AV中文字幕老熟妇| 免费特级毛片| 一本色道久久99一综合| 日产无人区一线二线三线| 我和丰满岳疯狂做爰| 国产永久免费CRM系统| 中文字幕乱码亚洲∧V日本1| 白嫩少妇BBW撒尿视频| 少妇人妻互换不带套| A片在线免费观看| 丰满大爆乳波霸奶| 啊灬啊别停灬啊灬快点| 白石茉莉奈AV| 大白肥妇BBVBBW高潮|