TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)實(shí)驗(yàn)原理和方法原理：細(xì)胞凋亡中染色體DNA的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb的大片段。然后大約30%的染色體DNA在Ca2和Mg？依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180~200bp核小體DNA多聚體。DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的37-0H末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的37-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，這類方法一般稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TUNEL）。由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA的斷裂，因而沒有37-OH形成，很少能夠被染色。

        細(xì)胞凋亡中染色體DNA 的斷裂是個(gè)漸進(jìn)的分階段的過程，染色體DNA首先在內(nèi)源性的核酸水解酶的作用下降解為50-300kb 的大片段。然后大約30 %的染色體DNA 在Ca2+和 Mg2+依賴的核酸內(nèi)切酶作用下，在核小體單位之間被隨機(jī)切斷，形成180~200bp核小體DNA多聚體。

　　DNA雙鏈斷裂或只要一條鏈上出現(xiàn)缺口而產(chǎn)生的一系列DNA的 3'-OH末端可在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT）的作用下，將脫氧核糖核苷酸和熒光素、過氧化物酶、堿性磷酸化酶或生物素形成的衍生物標(biāo)記到DNA的3'-末端，從而可進(jìn)行凋亡細(xì)胞的檢測(cè)，這類方法一般稱為脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的缺口末端標(biāo)記法（TUNEL)。

　　由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA 的斷裂，因而沒有3'-OH形成，很少能夠被染色。低分子量的DNA分離后，也可使用DNA聚合酶進(jìn)行缺口翻譯（nick translation)，使低分子量的DNA標(biāo)記或染色，然后分析凋亡細(xì)胞。

　　TUNEL或缺口翻譯法實(shí)際上是分子生物學(xué)與形態(tài)學(xué)相結(jié)合的研究方法,對(duì)完整的單個(gè)凋亡細(xì)胞核或凋亡小體進(jìn)行原位染色，能準(zhǔn)確的反應(yīng)細(xì)胞凋亡最典型的生物化學(xué)和形態(tài)特征，可用于石蠟包埋組織切片、冰凍組織切片、培養(yǎng)的細(xì)胞和從組織中分離的細(xì)胞的細(xì)胞凋廣測(cè)定，并可檢測(cè)出極少量的凋亡細(xì)胞，靈敏度遠(yuǎn)比一般的組織化學(xué)和生物化學(xué)測(cè)定法要高，因而在細(xì)胞凋亡的研究中已被廣泛采用。

2.包埋或者切片后，根據(jù)客戶所測(cè)指標(biāo)，選取合適的一抗.二抗進(jìn)行制片

3.（可選）根據(jù)上述所做好的切片進(jìn)行拍片

4.（可選）針對(duì)做好的玻片進(jìn)行分析，分析時(shí)選取較好的區(qū)域，分析三個(gè)視野

5.提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告：包括詳細(xì)的實(shí)驗(yàn)方法及實(shí)驗(yàn)結(jié)果的相關(guān)圖表

技術(shù)服務(wù)內(nèi)容

　　客戶須知

實(shí)驗(yàn)周期

       TUNEL（TdT-mediated dUTP nick end labeling）細(xì)胞凋亡檢測(cè)是用來檢測(cè)組織細(xì)胞在凋亡早期過程中細(xì)胞核DNA的斷裂情況，其原理是生物素biotinylate標(biāo)記的dUTP在脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶（TdT Enzyme）的作用下，可以連接到凋亡細(xì)胞中斷裂DNA的3’-OH末端，并與連接辣根過氧化酶（HRP，horse-radish peroxidase）的鏈霉親和素streptavidin特異性結(jié)合，后者又與POD底物H2O2、二氨基聯(lián)苯胺（DAB）產(chǎn)生深棕色反應(yīng)，特異準(zhǔn)確地定位正在凋亡的細(xì)胞，因而在光學(xué)顯微鏡下即可觀察凋亡細(xì)胞；由于正常的或正在增殖的細(xì)胞幾乎沒有DNA斷裂，因而沒有3’-OH形成，很少能夠被染色。本試劑盒適用于組織樣本（石蠟包埋、冰凍和超薄切片）和細(xì)胞樣本（細(xì)胞涂片）在單細(xì)胞水平上的凋亡原位檢測(cè)。還可應(yīng)用于抗腫瘤藥的藥效評(píng)價(jià)，以及通過雙色法確定細(xì)胞死亡類型和分化階段.

TUNEL細(xì)胞凋亡檢測(cè)服務(wù)實(shí)驗(yàn)方法

TUNEL 檢測(cè)對(duì)于貼壁細(xì)胞或細(xì)胞涂片

b.如果細(xì)胞貼得不牢，可以干燥樣品使細(xì)胞貼得更牢。

c.用4%多聚甲醛或碧云天生產(chǎn)的免疫染色固定液（P0098）固定細(xì)胞30-60分鐘。

d.用PBS或HBSS洗滌一次。

e.加入含0.1%TritonX-100的PBS，冰浴孵育2分鐘。

f.轉(zhuǎn)步驟5。

毓秀生物科技（上海）有限公司是一家專注于生物科技前沿技術(shù)研發(fā)和科研技術(shù)服務(wù)的公司，公司建有專業(yè)的分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn)室，為眾多生物醫(yī)藥企業(yè)、科研機(jī)構(gòu)、醫(yī)院及高校提供分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、病理形態(tài)學(xué)等方面科研服務(wù)。公司核心團(tuán)隊(duì)曾在國內(nèi)外許多優(yōu)秀學(xué)府從事過多年研發(fā)工作，秉承“為客戶創(chuàng)造價(jià)值，為員工實(shí)現(xiàn)夢(mèng)想，為社會(huì)創(chuàng)造財(cái)富"的經(jīng)營(yíng)理念，堅(jiān)持以技術(shù)創(chuàng)新為先導(dǎo)，以服務(wù)質(zhì)量為根本，為中國生物醫(yī)藥和科學(xué)研究提供優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品和技術(shù)服務(wù)。