更新時(shí)間：2024-09-26
fish技術(shù)服務(wù)(Florescence In-Situ Hybridization簡(jiǎn)稱FISH)是一種利用非放射性的熒光信號(hào)對(duì)原位雜交樣本進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。
fish技術(shù)服務(wù)(Florescence In-Situ Hybridization簡(jiǎn)稱FISH)是一種利用非放射性的熒光信號(hào)對(duì)原位雜交樣本進(jìn)行檢測(cè)的技術(shù)。它將熒光信號(hào)的高靈敏度、安全性，熒光信號(hào)的直觀性和原位雜交的高準(zhǔn)確性結(jié)合起來(lái)，通過(guò)熒光標(biāo)記的DNA探針與待測(cè)樣本的DNA進(jìn)行原位雜交，在熒光顯微鏡下對(duì)熒光信號(hào)進(jìn)行辨別和計(jì)數(shù)，從而對(duì)染色體或基因異常的細(xì)胞、組織樣本進(jìn)行檢測(cè)和診斷，為各種基因相關(guān)疾病的分型、預(yù)前和預(yù)后提供準(zhǔn)確的依據(jù)。自20世紀(jì)80年代末，Pinkel和Heiles將FISH技術(shù)引入染色體檢測(cè)領(lǐng)域后，F(xiàn)ISH技術(shù)就在臨床診斷及科研工作中得到了廣泛的運(yùn)用，顯示出與一些傳統(tǒng)技術(shù)相比的明顯優(yōu)勢(shì)。
熒光原位雜交技術(shù)fish技術(shù)服務(wù)與傳統(tǒng)的免疫組織化學(xué)法（IHC）相比，F(xiàn)ISH具有良好的穩(wěn)定性和可重復(fù)性。目前免疫組織化學(xué)法正廣泛應(yīng)用于腫瘤等多個(gè)領(lǐng)域的臨床診斷。免疫組化的檢測(cè)對(duì)象是疾病相關(guān)的蛋白。由于蛋白的表達(dá)和本身的構(gòu)象受各種因素的影響很大（例如酸、堿和變性劑），檢測(cè)條件的穩(wěn)定性對(duì)檢測(cè)結(jié)果至關(guān)重要。此外，免疫組化檢測(cè)結(jié)果的判斷依賴于檢測(cè)者對(duì)顯色結(jié)果的主觀判斷，對(duì)于一些弱陽(yáng)性的結(jié)果，不同的檢測(cè)者容易產(chǎn)生分歧。上述的因素都可能影響醫(yī)生對(duì)病情的終診斷。
熒光原位雜交技術(shù)fish技術(shù)服務(wù)的對(duì)象是細(xì)胞中的DNA，致密的雙螺旋結(jié)構(gòu)使DNA可以歷經(jīng)千百萬(wàn)年而依然保持良好，其結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，不易被環(huán)境條件影響，為熒光原位雜交技術(shù)的穩(wěn)定提供了良好的基礎(chǔ)。此外，熒光原位雜交結(jié)果的判定借助于對(duì)熒光的顏色判斷和信號(hào)計(jì)數(shù)，客觀地量化了檢測(cè)地結(jié)果。如果借助于相應(yīng)的FISH操作系統(tǒng)（例如Abbott-Vysis公司的Hybrit雜交儀和VP2000樣本預(yù)處理系統(tǒng)）和染色體成像系統(tǒng)就能實(shí)現(xiàn)整個(gè)FISH操作的自動(dòng)化，大限度的降低操作者和檢測(cè)者的主觀因素，確保結(jié)果的準(zhǔn)確性。
PCR由于靈敏度高，操作簡(jiǎn)便快捷是近年來(lái)應(yīng)用比較多的基因診斷技術(shù)，但PCR診斷技術(shù)的假陰性和假陽(yáng)性的比例較高，對(duì)同一樣本也只能作一次分析，不能重復(fù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果。隨著探針技術(shù)的不斷發(fā)展，F(xiàn)ISH目前的靈敏度已經(jīng)接近或達(dá)到PCR的水平，并能很好彌補(bǔ)PCR技術(shù)的局限。熒光原位雜交技術(shù)fish檢測(cè)不僅有極低的假陽(yáng)性、假陰性的比例（以Abbott-Vysis的產(chǎn)前診斷探針為例，29,000例的使用結(jié)果證實(shí)正確率高達(dá)99.9％），還能對(duì)同一樣本進(jìn)行多次的FISH操作以及利用不同顏色的熒光探針一次檢測(cè)多個(gè)染色體或基因的異常，大大節(jié)省了檢測(cè)的時(shí)間。此外，通過(guò)fish技術(shù)服務(wù)可以對(duì)染色體或特定基因的數(shù)目異常，特定片斷的缺失、易位和重排進(jìn)行診斷研究。
熒光原位雜交（Fluorescence in situ hybridization, FISH）技術(shù)是一種應(yīng)用非放射性熒光物質(zhì)依靠核酸探針雜交原理在核中或染色體上顯示DNA序列位置的方法。該技術(shù)具有快速、安全、靈敏度高以及探針可長(zhǎng)期保存等特點(diǎn)，目前已廣泛應(yīng)用于細(xì)胞遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、基因定位、基因作圖、基因擴(kuò)增,產(chǎn)前診斷及哺乳動(dòng)物染色體進(jìn)化研究等領(lǐng)域。
簡(jiǎn)單點(diǎn)說(shuō)就是堿基互補(bǔ)配對(duì)原則，就是我們將外源核酸（也就是常說(shuō)的分子探針）與組織、細(xì)胞上待檢測(cè)的DNA或RNA進(jìn)行配對(duì)，形成核酸雜交分子，再經(jīng)過(guò)一定手段將這個(gè)雜交分子的位置顯示出來(lái)。
RNA—RNA＞DNA—RNA＞DNA—DNA
fish技術(shù)服務(wù)已經(jīng)在細(xì)胞遺傳學(xué)、腫瘤生物學(xué)、基因定位、基因作圖、基因擴(kuò)增、產(chǎn)前診斷及哺乳動(dòng)物染色體進(jìn)化研究等領(lǐng)域得到了廣泛應(yīng)用。
熒光原位雜交簡(jiǎn)化了染色體結(jié)構(gòu)變異的檢測(cè)。如植物染色體的非整倍體是由于染色體行為異常，即可能是雙親配子染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)差異引起或染色體親緣關(guān)系較遠(yuǎn)等因素導(dǎo)致。利用原位雜交可比較容易地檢測(cè)出缺失、附加或替換的染色體。
FISH空間分辨率和敏感性使得親本和擴(kuò)增基因在抗病蟲害細(xì)胞中定位成為可能。被擴(kuò)增基因主要在同一染色體臂上，但離初始親本基因有一定距離，且經(jīng)常獨(dú)立地位于染色體端粒部位;FISH分析表明細(xì)胞斷裂可能是由于染色體含有擴(kuò)增區(qū)域的結(jié)構(gòu)重排。同時(shí)用FISH 可定位轉(zhuǎn)基因植物中外源基因位置和拷貝數(shù)，此法在番茄、煙草、大麥、小麥、黑麥等作物中已獲成功。利用FISH技術(shù)也可檢測(cè)一些與遺傳性疾病相關(guān)的基因缺失，如成功檢測(cè)了aniridia疾病患者的缺失基因。
熒光原位雜交的基因定位技術(shù)有著廣泛的應(yīng)用。PP2Ac突變型肺癌相關(guān)基因在染色體區(qū)域的定位，熒光顯微鏡下觀察記錄和分析雜交信號(hào)的特征。結(jié)果在正常人淋巴細(xì)胞的染色體5q23-31可見明顯雜交信號(hào)，在GLC-82細(xì)胞的5號(hào)和7號(hào)染色體上出現(xiàn)較強(qiáng)信號(hào)。說(shuō)明點(diǎn)突變引起PP2Ac活性改變，從而基因易位，導(dǎo)致肺腫瘤的產(chǎn)生。FISH技術(shù)與生化、計(jì)算機(jī)和重組DNA技術(shù)結(jié)合檢測(cè)Alu位點(diǎn)，表明DNA序列與帶型有關(guān)。用FISH技術(shù)對(duì)人類基因組中編碼基因分布的研究揭示，基因主要集中在染色體上G+C(占全基因組35% )的DNA區(qū)段。FISH技術(shù)為著絲粒結(jié)構(gòu)研究提供了重要手段。應(yīng)用FISH技術(shù)可直接觀察染色體端粒，這簡(jiǎn)化了染色體在核內(nèi)的結(jié)構(gòu)和功能研究。
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